BrdU染色

BrdU染色

服务介绍：

可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)，渗入正在复制的DNA分子，活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色。

实验流程：

1.加破膜液破膜20min；

2.DAPI染核8min；

3.用4%的多聚甲醛固定10min；

4.用纯水稀释盐酸(盐酸：纯水=1:7)，滴加到爬片上37℃孵育40min；

5.用4%的多聚甲醛固定10min；

6.加3%BSA封闭，孵一抗4℃过夜，PBS冲洗3次；

7.孵二抗50min， PBS冲洗3次；

8.滴加一滴抗荧光淬灭封片剂封片，显微镜观察。

备注：组织样本的BRDU 染色，可以按照常规的免疫荧光流程进行操作，不需要用盐酸处理。细胞样本的BRDU染色，则需要严格按照以上的步骤进行。

送样运输要求：

1.组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。

2.石蜡切片常温保存运输

3.冰冻切片-20℃保存运输

4.细胞爬片PFA固定15min后用无菌PBS洗涤后用无菌PBS浸泡，4℃冰袋保存运输到实验室。

注意事项：

1.BRDU,检测之前需动物活体注射化学试剂brdu，细胞需用化学试剂brdu处理造模，否则无阳性。