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木聚糖酶(检测服务)
服务介绍:
木聚糖酶能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂发生显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通过测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中木聚糖酶的活力。
背景介绍:
木聚糖酶(Xylanase)又称戊聚糖酶,是指能专一降解木聚糖为低聚木糖和木糖的水解酶。它是一组复杂的复合酶系,主要包括β-1,4-木聚糖酶和β-木糖苷酶等。木聚糖酶的活性来源于经选择的木霉菌等微生物,经过基因工程的转化、发酵、提取而得。
木聚糖酶在自然界分布广泛,可从动物、植物和微生物中获得。微生物来源的木聚糖酶普遍存在于自然界中,且种类繁多,应用领域广泛。目前研究和应用得最多的是细菌和真菌来源的木聚糖酶,其中细菌可以产生碱性和酸性木聚糖酶。
应用:
1、改善消化系统功能:木聚糖酶可以分解食物中的木聚糖,使食物更容易被人体消化和吸收,还可以促进肠道蠕动,有助于改善便秘、消化不良等症状。
2、促进营养物质的吸收:木聚糖酶可以分解食物中的蛋白质、脂肪等营养物质,使其更容易被人体吸收利用,有助于增强体质,提高免疫力。
3、工业应用:木聚糖酶在酿造、饲料工业中也有广泛应用。它可以分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料用粮中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用。
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品:
①固体样品称取试样两份,精确至0.001 g。 加入4ml Assay buffer,充分溶解,并定容至10 ml,在4 °C条件下避光保存1~2h。1000g离心3~5min,取上清液,再用Assay buffer做适当稀释、定容(稀释后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之间)。
②液体样品可以直接用Assay buffer稀释、定容(稀释后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在 0.04~0.10 U/ml之间)
2、配制木聚糖溶液:准确称取0.15g 木聚糖,使充分溶解于8ml去离子和5ml NH水溶液(3×)中,通过pH计测定,用YS溶液调节pH至5.5~5.6,补水至15ml
2、配制NH水溶液(1×):取1份NH水溶液(3×)和2份去离子水混合即成。
3、标准曲线绘制:取8支离心管按下表设置,准确吸取木糖标准(10mg/ml)与Assay buffer,即得不同浓度的木糖梯度标准。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
木糖标准(10mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.07 |
Assay buffer | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 | 0.93 |
木糖标准(mg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 |
取1支离心管,加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS试剂,混匀,沸水浴加热5min,自来水冷却至室温,加NH水溶液(1×)0.32ml,即为空白管。另取7支离心管,加入0.04ml 37℃预热的Assay buffer、0.04ml木糖梯度标准和0.1mlDNS试剂,混匀,沸水浴加热5min,自来水冷却至室温,加NH水溶液(1×)0.32ml,即为标准管。以空白管调零,酶标仪测定540nm处各管的吸光度。
测定样品
①取适量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的离心管中,37°C 平衡 20 min;木聚糖溶液使用之前应充分摇匀。
②取2支离心管按下表设置依次加入相应试剂:
加入物(ml) | 对照管 | 测定管 |
酶提取液 | 0.04 | 0.04 |
Assay buffer | 0.04 | - |
木聚糖溶液 | - | 0.04 |
37℃水浴30min | ||
DNS试剂 | 0.1 | 0.1 |
立即摇匀,放入沸水浴中显色5min, 立即取出,流水冷却至室温,加 NH水溶液(1×)0.32ml |
以空白管调零,酶标仪测定540nm处对照管和测定管的吸光度(分别记为A1、A0)。
实验结果:
全自动生化仪检测后导出结果,结果由EXCEL形式发送。
送样须知:
1.南京和上海地区的客户可提供上门取样服务,提前一天联系
2.外地客户可邮寄样本,样本运输应符合一般的生物学要求,密封加冰袋或者干冰运输
3.若细胞、血清、组织样本具有潜在的传染性或致病性,请务必提前告知
4.测试结束提供实验报告后,样本可以保留1个月,若需保留样本或者回收样本请提前告知。
备注:本公司对客户的项目的专有技术和资料(包括实验方案,测试结果,样本等)负有绝对保密的责任。
仅供科研实验用,不做其他用途!
木聚糖酶(检测服务)