上海信帆生物：蛋白凝胶染料随心选，不止是考马斯蓝

与DNA凝胶电泳一样，蛋白质凝胶电泳也是实验室中稀松平常的工作。无论是Western blot还是质谱分析，都离不开蛋白电泳。研究人员通过大小（1D）和电荷（2D）来分辨蛋白质。当然，仅仅分离蛋白是不够的，它们必须要经过染色。染料的选择有很多，具体选哪种，这取决于灵敏度要求、现有的设备和下游的应用。

常规之选

研究人员主要使用三种染料来处理日常的蛋白凝胶：考马斯蓝、银染和荧光。据Sigma-Aldrich公司蛋白技术的研发Jeffrey Turner介绍，染料的选择基本上可以归结为“灵敏度 vs. 速度”。

考马斯蓝也许是zui常用的染料。作为一种可见的显色（亮蓝色）染料，它不需要任何特殊的设备。不过，Bio-Rad的业务开发Ning Liu认为，它的灵敏度也zui低，检测极限大约在10-100 ng蛋白质。

很多公司提供不同配方的考马斯蓝染料，它们在使用简便程度、整体染色时间和脱色要求上各有不同。例如，有些需要在乙醇/乙酸中固定，而有些只使用纯水。Expedeon的InstantBlue™试剂可在电泳后直接添加到凝胶中，而不需要固定或脱色，染色可在15分钟内完成。Bio-Rad的QC Colloidal Coomassie Stain操作则建议慢慢来，以便达到更好的效果。整个过程包括在40%乙醇/10%乙酸中固定15分钟，之后染色1-20个小时，再脱色1-3小时。

有了赛默飞世尔推出的Pierce™ Power Stainer，研究人员可以让考马斯蓝染色自动化。据它的产品Emily Goplen介绍，这台设备可对两块凝胶进行染色和脱色。“尽管传统的染色需要几小时甚至，Power Stainer却能在10分钟内完成染色和脱色的过程，并且预制胶和自制胶都适用，”她说。

另一种常用方法是银染，每条带的灵敏度大约在0.1-0.25 ng。操作过程没有脱色步骤，但是一个很长的过程，大约在2小时左右，而且相当讲究。此外，据Turner介绍，操作需要用到一些有害的化学物质，如甲醛和银，在通风橱中进行。因此，人们一般不大愿意用这种方法，除非灵敏度很重要。

荧光染料的灵敏度则居中，可检测几纳克的蛋白质，不过你得有一个兼容的凝胶成像系统或透射仪。与考马斯蓝和银染一样，荧光染色通常在电泳后进行，需要固定和脱色，不过也有例外。例如，SYPRO Ruby需要脱色，但Oriole和Flamingo不需要，因为游离的染料不发荧光。“染料本身不会被激光激发，只有当它与蛋白结合时才被激发，”Liu解释道。

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