感受态细胞的电转化过程

        zui近，上海信帆生物科技有限公司在进行了一项大肠杆菌电转化感受态细胞的实验。实验过程操作规范顺利，得出的结果良好。

实验所需试剂：国产细胞菌株、培养基、10%甘油、DNA细胞

*天：
1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养
2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用
3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

第二天：
4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中
5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
6. 定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次）
7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）
8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）
9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。
10. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
12. 离心，弃上清液
13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞 14. 照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）
15. 用10%甘油重悬浮细胞至zui终体积为2-3ml
16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存

转化方法:
1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ，冰上培育约5分钟
2. 添加1-3μl DNA ，冰上培育约5分钟
3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中
4. 加载P1000，准备好300μl LB 或 2xYT
5. 对电穿孔容器进行脉冲（200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏）（检查时间常数，应该在3以上）
6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中
7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原
8. 转移细胞至适当的选择培养基上培养