植物类黄酮检测试剂盒的技术参数

 植物类黄酮检测试剂盒的技术参数

一、测定意义：

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人

体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症

等作用

二、测定原理：

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处

有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸

光值，即可计算样品类黄酮含量。

三、仪器设备（自备）：

烘箱、粉碎仪、研钵、筛子、60%乙醇、离心机、可见分

光光度计、60℃震荡恒温箱。

四、试剂组成：（50T/48 样）

提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体2mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体2mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：标准品粉剂 1mg×1支，使用时加入1mL 60%乙醇，

于60℃恒温振荡10分钟使其溶解，配成mg/mL

标准应用液。

五、操作步骤：

1、类黄酮提取：

干样：将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，

加入2mL 提取液，60℃震荡提取2小时，10000g，室温

离心10min，取上清，待测。

鲜样：将植物用生理盐水清洗后，将表面水分擦干，剪碎，

液氮研磨成粉状，称取约0.05g，加入2mL提取液（含

量低可酌情减少提取液量），60℃震荡提取2小时，

10000g，室温离心10min，取上清，待测。

2、操作表：

注：正式实验前最好取1-2例相对差异较大的样本进行预试，

ΔA测定大于1时需要稀释样本上清后再测定。

六、计算公式：

制作标准曲线：将1mg/mL标准液用60%乙醇稀释成

0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、

0.02mg/mL几个浓度按操作表标准管及空白管进行实验，

得出OD值后绘制标准曲线，如下：

则计算公式为：

类黄酮含量（mg/g）=（ΔA测定-0.0141）÷9.0771×提取液总体

积（2mL）÷样本质量（g）

七、技术参数：

1、试剂盒检出限为1μg/mL，如果ΔA测定值大于1，则需将样本

上清液作适当稀释以后测定；

2、本试剂盒回收率可达95%-100%，稳定性好，准确性高；

3、标准品配置时温度低会使其溶解缓慢，60℃振荡溶解时需

密封好，防止液体溢出造成损失；

4、假如没有分光光度计，也可用酶标仪进行测定，波长不变

（或者在±10nm波动范围内选择）。

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