Western Blot检测服务的实验流程

Western Blot检测服务的实验流程

实验流程：

蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;

送样运输要求：新鲜组织，100mg以上，干冰运输。细胞量为5*10^6以上，收集细胞沉淀，干冰运输。

预实验的内容如下：

1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；

2）选择合适的封闭液及封闭时间；

3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

Western blot结果及数据提供（提供以下两种图片，做之前需要和销售确认好需要哪种）

内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张，可提供扫描图，实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务，将提供检测报告

服务内容：

从动物细胞、人或者动物组织、细菌、植物样品中提取蛋白样品。

对蛋白样品进行半定量分析

western检测

电泳：聚丙烯酰氨凝胶电泳分离蛋白样品

转膜：湿转

抗体孵育：使用抗体检测膜上的特定蛋白

Western blot样本要求

客户需新鲜或正确保存的蛋白样品， 检测目的蛋白的一抗（或由本公司代购）。样品要求为：

1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。

3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。

注意事项：

对于细胞和一些微生物样本，可去除培养基后，加裂解液制备蛋白样品；若未能及时制备蛋白样品，去除培养基后，将其液氮速冻后保存于-80℃（约一个月）或保存于液氮（约三个月）；运输时，样本（含培养基）加冰袋，保持培养基低温但不结冰，或者样本去除培养基后加干冰。

提取蛋白的样本最好是新鲜的，同时，以尽可能地提取有效蛋白为准则；样本需避免反复冻融。

所有样本均不建议保存于-20℃。-20℃时，组织、细胞内的水会结晶，细胞活性和组织微观结构会受到伤害，生物大分子受到组织、细胞内多种因素的影响，稳定性可能会明显降低，但部分纯化的大分子可以短中期保存。

 -80℃保存条件时，样本内的生化反应减弱，可中期保持组织细胞内大分子的稳定性，短期保持细胞活性和组织微观结构；

液氮保存可长期保持组织细胞内大分子的稳定性、细胞活性和组织微观结构；液氮保存时，盛装样本的Ep管管口需用封口膜密封，防止管口爆开造成交叉污染。

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