层析柱装填方法您知道吗？

层析柱装填方法您知道吗？

1. 填装之前，检查层析柱各接头、部件不能有破损漏气，并将层析柱清洗干净，壁上不要有残留小颗粒，会影响层析效果；

2. 确保填料、层析柱、所有的缓冲液以及样品温度一致，温度不一致容易导致产生气泡。

3. 所有过柱子的液体（包括水、平衡缓冲液、洗脱缓冲液、再生溶液）用0.45um滤膜抽滤，并进行超声脱气，注意填料不可超声脱气；

4. 将填料用纯水清洗几遍，洗掉保存液，并将上层的细小颗粒弃去；

5. 关闭层析柱出水口，玻璃棒引流往层析柱内倒入约1/4柱体积的水（或缓冲液），务必使底端无气泡；

6. 将填料用玻璃棒搅匀成悬浆，用玻璃棒引流，均匀的一次性倒入柱子内，注意务必不要产生气泡，待柱子内填料稳定，打开出液管，使凝胶在柱内自由沉降。

7. 如果是手动操作，将柱子用纯水冲几个柱体积，使柱床稳定；

如果仪器操作，用逐渐加大流速的方法，将填料压实，注意：既不能过松，也不能过紧，要注意不能超过填料的最大耐压。

8. 上样前，样品要进行离心或者用0.45um滤膜过滤；

注意：

1. 始终保持柱内液面高于凝胶表面，否则水分蒸发，凝胶变干，影响填料的纯化效果，有转换接头的柱子，需要保证进出液管密封；

2. 防止液体流干，使柱内混入大量气泡，影响纯化效果；

3. 切莫超过填料的最大耐压，以免对填料造成不可逆的损坏；

4. 注意不要超过层析柱的最大耐压，超过最大耐压可能会漏液，甚至冲掉柱头；

5. 凝胶一般都比较昂贵，需小心操作，实验后回收，尽量避免污染、浪费和损失。

层析柱装填方法您知道吗？