链球菌G蛋白琼脂糖凝胶FF预装柱的使用注意事项

链球菌G蛋白琼脂糖凝胶FF预装柱的使用注意事项

链球菌G蛋白（Streptococcus Protein G 简称SPG）是G、C型链球菌细胞壁中的一种蛋白质，能特异性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段结合而不影响其Fab段与抗原分子结合的能力，其亲和填料可以用于从血清、腹水、组织培养物等上清中结合吸附并纯化免疫球蛋白（抗体）。

技术指标：

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。

应用举例：

结合缓冲液：20 mM磷酸盐缓冲液（PB），pH 7.4

洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸-盐酸缓冲液，pH 2.7

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重组蛋白G琼脂糖凝胶预填柱，用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；

2)用结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；

3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释至50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；

4)用结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积至基线；

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；

6)每次使用后再用3 ~ 5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。

图 1

注意事项：

1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。

4)通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M甘氨酸-盐酸缓冲液（pH 2.0 ~ 2.7）洗3 ~ 5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。

5)使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4 ~ 6 h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。

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