Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF预装柱的使用说明

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF预装柱的使用说明

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF（Strep-Tactin Berpharose FF）

1.      产品介绍

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于纯化Strep II标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1kDa左右，一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。

本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素（Streptavidin）的突变体，与链霉亲和素相比，Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能力至少强10倍以上，能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性，一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。

Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱，该洗脱方式比较温和，一般不会影响蛋白质的性质。如蛋白质能耐受一定的碱，也可用碱液洗脱，比如10mM NaOH等。Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱清洗，可以用0.5M NaOH进行再生清洗和去除热源等。另外，2-(4-羟基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝胶再生，过量的HABA能够竞争下脱硫生物素，并且在无HABA的缓冲液中，能将凝胶上的HABA洗脱。

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml

3.产品性能

4.纯化流程

①推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓冲液：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0；

或20mM NaH2PO4，280mM NaCl，6mM KCl，pH7.4

洗脱缓冲液：结合缓冲液+ 2.5mM脱硫生物素；

或10mM NaOH

再生缓冲液：0.5M NaOH；

或结合缓冲液+1mM HABA

②样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处

理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。

③样品纯化

（1）平衡：取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用蒸馏

水清洗5个柱体积去除保存液，再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100cm/h。

（2）上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20-100cm/h，可根据实际结合情

况选择流速，能获得较好的效果。

（3）再平衡：上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去

杂质，推荐流速为100cm/h。

（4）洗脱：用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积，建议流速为100cm/h，收集的洗脱

液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

（5）NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3-5个柱体积，并用0.5M

NaOH再生3-5个柱体积，再用蒸馏水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或进行下

一次纯化。

（6）HABA再生：用脱硫生物素洗脱目的蛋白的，还可以用HABA缓冲液再生，

一般用HABA的结合缓冲液洗15个柱体积，再用结合缓冲液洗30个柱体积，然后可

以用20%乙醇保存柱子，或进行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变为红橙色，

在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色，这种再生方式一般使用体积会大些。

5.注意事项：

1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

2)本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。

3) 2-25℃,常压,避光运输

4）仅供科研实验使用

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF预装柱的使用说明