玉米赤霉烯酮酶免检测试剂盒适合检测什么样本？

玉米赤霉烯酮酶免检测试剂盒适合检测什么样本？

上海信帆生物供应玉米赤霉烯酮酶免检测试剂盒，产品质量稳定，现货充足。

玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)ELISA 检测试剂盒说明书 

【概要】

玉米赤霉烯酮（Zearaleaone，ZEN）又称F-2 毒素，是玉米赤霉菌的代谢产物，有雌激素样作用，具有较强的生殖毒性致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大经济损失。

【适用范围】

本试剂盒可定性、定量检测谷物及其加工制品和饲料中的

玉米赤霉烯酮。

【试验原理】

本试剂盒采用间接竞争ELISA 方法，在酶标板微孔条上预包被玉米赤霉烯酮抗原，样本中玉米赤霉烯酮和此抗原竞争结合抗玉米赤霉烯酮抗体（抗试剂），同时抗玉米赤霉烯酮抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经TMB 底物显色，样本吸光值与其所含玉米赤霉烯酮的含量成负相关，对照标准曲线，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中玉米赤霉烯酮的含量。

【试剂盒组成】

1. 96 孔板（8 孔*12 条）

2. ZEN 标准溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）

0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL

3. ZEN 酶标物1 瓶.............. ....................................6mL

4. ZEN 抗试剂1 瓶....................................................6mL

5. 底物液1 瓶.............................................................6mL

6. 显色液1 瓶.............................................................6mL

7. 终止液1 瓶.............................................................6mL

8. 浓缩洗涤液（20×） 1 瓶...............................20mL

9. 样品稀释液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL

10. 样品稀释液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL

11. 反应板支架.............................................................1 块

注：48 孔型号试剂盒内容物数量、体积略有差别

【需要而未提供的设备及试剂】

设备：

┅┅酶标仪450nm

┅┅振荡器

┅┅粉碎机

┅┅离心机

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：单道20μL~200μL、100μL~1000μL

┅┅甲醇

┅┅去离子水

注：以上仪器均可代购

【试剂配制】

1. 洗涤工作液：将浓缩洗涤液用去离子水按1:19 体积比进行稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水）。

2. 60%甲醇-水：取无水甲醇，用去离子水按6:4 体积比例稀释（6 份无水甲醇＋4 份水）。

【样本前处理步骤】

一、小麦、大麦等谷物及其加工制品（稀释倍数：20）

1. 称取5.0g 粉碎后样品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振荡30min 后过滤或4000rpm 离心5-10min；

3. 将滤液或上清液用去离子水以1:3 稀释（例：1mL 滤液+3mL 去离子水），充分混匀后即为待测样液；

4. 移取该样液50uL 进行检测。

二、玉米粉、麦类、麸皮、豆粕等谷物类以及玉米蛋白粉、鸡料等饲料（稀释倍数：60）

1. 称取5.0g 粉碎后样品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振荡30min 后过滤或4000rpm 离心5-10min；

3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅰ以1:11 稀释（例：100μL滤液+1100μL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待测样液；

4. 稀释后的待测样液需pH 值约7.0 左右，移取该液50uL进行检测。

三、DDGS、玉米皮等饲料原料及猪料、鸭料、牛料等饲料混

合料（稀释倍数：60）

1. 称取5.0g 粉碎后样品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振荡30min 后过滤或4000rpm 离心5-10min；

3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅱ以1:11 稀释（例：100μL滤液+1100μL 样品稀释液Ⅱ），充分混匀后即为待测样液；

4. 稀释后的待测样液需pH 值约7.0 左右，移取该液50uL 进行检测。

注意：若样品中ZEN 偏高，建议将样品提取液再进一步稀释后检测。

【检测步骤】

一、测定前须知：

1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温（20~25℃）。

2. 使用之后立即将所有试剂及剩余板条放置2~8℃。

3. ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致

性，正确的洗板操作是ELISA 操作中的要点。

4. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，可用盖板膜盖

住微孔板。

二、操作步骤：

1. 将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20~25℃）30min

以上，液体试剂使用前均须摇匀。

2. 取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板放回铝箔袋中，

放置于2~8℃冷藏。不可冷冻。

3. 配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。

4. 将样本和标准品对应微孔编号，建议每个样本和标准品做2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5. 每孔加入250μL 左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干。

6. 分别加入标准溶液/待测样液50μL 到对应的微孔中，加入酶标物50μL/孔，后再加入抗试剂50μL/孔，轻轻震荡混匀，遮盖后室温（25℃）避光反应20min。

7. 小心揭开盖板，甩掉反应液，加入洗涤液250μL/孔充分洗涤5 次，每次间隔40s，用吸水纸拍干。

8. 每孔分别加入底物液和显色液各50μL，轻轻震荡混匀，遮盖后室温（25℃）避光显色15min。

9. 加入终止液50μL/孔，轻轻震荡混匀，设酶标仪于450nm处读取每孔OD 值。

(若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。

★注：该试剂盒佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导

致检测吸光度值和灵敏度发生变化。若环境温度高于或低于

25℃，请适当缩短或增加反应及显色时间。如有疑问，欢迎

垂询。

【结果判定】

标准曲线的绘制与计算

用酶标仪测得每孔的光密度值(A)，绘制标准曲线。通过

准曲线，可准确定量样品中ZEN 含量。

标准曲线：横坐标为ZEN 标准浓度的对数，纵坐标为百

分比（即各标准品孔和样品孔光密度值除以0 ng/mL 标准品

孔光密度值(A0)再乘以100%所得， 光密度值(标准孔或样品

孔) ／光密度值(A0)×100%=%(纵坐标)）。相应每个样品的

ZEN 浓度可从曲线上获得。欢迎索取专门的数据处理软

件进行计算。

备注：试剂盒初筛后，若出现阳性结果，建议用仲裁法进一步

确证。

【注意事项】

1. 试剂及样本没有恢复到室温（20~25℃）会导致所有标准

的OD 值偏低。

2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准

曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应

立即进行下一步操作。

3. 每种试剂使用前均需摇匀。

4. 反应终止液为2M 硫酸，避免接触皮肤。

5. 不要使用过了有效期的试剂盒；也不要掺杂使用过了有

效期的试剂盒；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6. 储存条件：试剂盒保存于2~8℃，不能冷冻，将不用的

微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏

感，因此要避光保存。

7. 试剂变质的迹象：显色试剂有任何颜色表明显色剂变质，

应当弃之。0 标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5

（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8. 对玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸钠（10%，v/v）

溶液浸泡过夜。

9. 该试剂盒采用室温反应（20~25℃），当反应温度高于

25℃或者低于20℃时，均需相应缩短或延长反应时间，

【贮藏条件及保存期】

贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。

保存期：该产品有效期为6 个月。生物试剂日期见包装盒。

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