PRODUCT CLASSIFICATION
产品分类信帆生物专业提供β-淀粉酶,产品质量稳定,*,确保销售给客户的产品是能够符合质量标准,适合客户要求的产品。本产品*,欢迎新老客户前来咨询订购.
测定意义:
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理:
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:50mL×1瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;
试剂二:40mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
称取约0.1g样本,加入0.8mL蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取15min,每5min振荡1次,使其充分提取;3000g,常温离心10min,取上清液加蒸馏水定容至10 mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL双蒸水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
测定步骤和操作表:
试剂名称(μL) | α‑淀粉酶活力测定 | 总淀粉酶活力测定 | ||
对照管 | 测定管 | 对照管 | 测定管 | |
淀粉酶原液 | 250 | 250 |
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70℃水浴15min左右,冷却
淀粉酶稀释液 |
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| 250 | 250 |
试剂一 | 500 |
| 500 |
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将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右
试剂二 | 250 | 250 | 250 | 250 |
在40℃恒温水浴中准确保温5min
试剂一 |
| 500 |
| 500 |
混匀,室温静置10min,在540nm下测定吸光度,从左到右分别记为A1、A2、A3和A4。
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