WB实验代测基本过程介绍

　　WB实验代测基本过程介绍
　　WB实验代测，客户只需要提供样本，其余所有试剂均由我司提供，下面我们就做WB实验代测的原理以及大致需要的试剂做了一个汇总。western免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
　　1、获取细胞或组织裂解物
　　1）根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer；
　　2）选择合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而保证检测的准确性。
　　2、蛋白定量
　　3、电泳分离蛋白质
　　4、转膜：根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。
　　5、封闭：去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。
　　6、一抗孵育一抗的选择成功与否，是整个WB实验代测成功的关键，选择一抗有以下几个注意点：
　　1）选择适合检测标本种属的一抗；
　　2）选择适用于WB实验方法的一抗；
　　3）选择单克隆抗体或者经过亲和纯化的多克隆抗体。
　　7、二抗孵育：孵育条件一般为室温1-2小时。
　　8、底物孵育：选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
　　9、结果分析和检测：凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。