上海信帆：如何配制合适的buffer？

      生物系统对pH的变化非常敏感，PH的变化可能改变或甚至终止正在进行的实验。 因此，配制有效的保持实验pH稳定的缓冲液对实验的成功至关重要。

建立一个良好的缓冲体系，主要要考虑以下标准：

1. pKa

大多数生物反应发生在PH 6-8之间，因此理想的缓冲液需要具有在该范围内的pKa值，以提供zui大缓冲能力。 大多数缓冲液在20℃，1个pKa单位内的pH下能地工作。 如果你认为你的实验会降低反应的pH值，那么选择一个pKa值略低于工作pH值的缓冲液。 同样，如果您希望实验提高您的工作pH，请选择pKa略高的缓冲液。

2. 溶解性

缓冲液应非常易溶于水，在非极性溶剂（脂肪，油和有机溶剂）中极少溶解。 这防止缓冲液积累在细胞膜，囊泡和其他非极性区室中。

3. 膜不渗透性

缓冲液不应该容易地通过细胞膜 ，这可以减少缓冲液在亚细胞结构中不成比例的累积。

4. zui小盐效应

盐虽可以调节化合物的缓冲能力，但高离子缓冲液可引起生物系统的问题或其它反应。 如：在钙依赖的反应中应该避免柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液（Tris也能螯合钙）。

5. 对解离的影响

缓冲液浓度、温度和离子强度应当对缓冲液的解离具有zui小的影响。

6. 离子强度

确保你的缓冲液对你的实验环境的离子浓度没有太大的影响，正常生理离子强度为：100-200mM的KCl或NaCl。 一些缓冲液，如磷酸盐，可以显著影响溶液中离子的浓度。

7. 阳离子相互作用

如果缓冲液和阳离子配体形成复合物，该复合物应是可溶的。 理想情况是，至少一些缓冲化合物不会形成复合物。

8. 稳定性

缓冲液应当是化学稳定的，抵抗酶促和非酶促降解

9. 生化惰性

缓冲液不应影响或参与任何生化反应。

10. 光吸收

缓冲剂不应吸收波长在230nm和700nm之间的可见光或紫外光。 这防止了对分光光度测定的干扰。

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